麻疹病毒和风疹病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）说明书
【产品名称】
通用名称：麻疹病毒和风疹病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）
【包装规格】10人份/盒，，，20人份/盒，，，50人份/盒。。。
【预期用途】
本品用于定性检测咽拭子样本中麻疹病毒(MV)和风疹病毒(RV)核酸。。。
麻疹病毒是单股负链RNA病毒，，，属于副粘病毒科麻疹病毒属。。。麻疹是一种由麻疹病毒引起的一种急性呼吸道熏染病，，，临床体现为发热、出疹、咳嗽。。。
风疹病毒是披膜病毒科风疹病毒属的唯一成员，，，为单股正链RNA病毒，，，风疹是一种由风疹病毒引起的急性发热出疹熏染病，，，临床体现为发热和出疹，，，包括先天性熏染和后天获得性熏染。。。临床上以前驱期短、低热、皮疹和耳后、枕部淋投合肿大为特征。。。
麻疹和风疹均是通过呼吸道熏染，，，以急性发热出疹为特征的熏染病，，，常泛起盛行或爆发，，，严重危害儿童和青少年的康健。。。从临床体现优势疹、麻疹与其它发热出疹性疾病难以判别。。。实验室检测要领现在主要有病毒疏散、血清学检测、核酸检测等。。。
【磨练原理】
本品接纳实时荧光PCR手艺，，，以麻疹病毒和风疹病毒基因组守旧区作为扩增靶区域，，，设计特异性引物和探针举行PCR扩增，，，在一个反映系统中定性检测样品是否含有麻疹病毒或者风疹病毒核酸。。。本品含有内标检测系统可监控核酸提取、反转录及PCR扩增历程，，，阻止泛起假阴性检测效果。。。
【主要组成因素】
组份名称 主要因素 规格及数目（单位：支）
  10人份/盒 20人份/盒 50人份/盒
反映液A 引物、探针、dNTP、Mg2+、K+。。。 180μl×1 360μl×1 900μl×1
反映液B 反转录酶、DNA聚合酶、RNA酶抑制剂、甘油。。。 35μl×1 65μl×1 160μl×1
阳性比照 含麻疹病毒和风疹病毒特异性片断的质粒。。。 20μl×1 50μl×1 100μl×1
阴性比照 经焦碳酸二乙酯处理的纯化水。。。 500μl×1 500μl×1 500μl×1
【贮存条件及有用期】
避光-20±5℃贮存，，，有用期12个月。。。
重复冻融次数不宜凌驾10次，，，开封后-20℃下三个月内用完。。。生产日期及失效日期见标签。。。
【适用仪器】
ABI7500、Stratagene Mx3000P、Bio-Rad CFX96荧光PCR仪。。。
【样本要求】
适用标本类型为咽拭子。。。
样本收罗：将无菌棉拭子稍蘸心理盐水，，，重复涂抹患者咽部数次，，，然后将棉拭子浸于1 mL～2 mL标本维持液（含500～1 000单位（Unit，，，U）/mL青霉素、500 μg/mL～1 000 μg/mL链霉素和2％牛血清DMEM液）或者VTM中，，，并重复挤压后，，，弃棉拭子。。。
样本收罗后应实时检测，，，-20±5℃生涯期6个月，，，-70℃可以恒久生涯。。。样本阻止重复冻融，，，如不可阻止，，，重复冻融次数不宜凌驾5次，，，接纳低温运输。。。
【磨练要领】
1. 样本处理（样本制备区）
用QIAGEN公司的QIAamp Viral RNA Mini Kit（货号：52904）或者本公司的核酸提取试剂盒（货号：HT5025，，，备案号：粤珠械20140038号）提取RNA，，，按说明书操作。。。
2. PCR试剂准备（试剂准备区）
从试剂盒中取出反映液A、反映液B，，，室温融化后振荡混匀，，，瞬时离心数秒后使用。。。
取N个（N=待测样本数+阴性比照+阳性比照）PCR反映管，，，每管反映液配制如下表：
反映液组份 加量（μl）/人份
反映液A 17
反映液B 3
总体积 20
将各组份充分混淆后，，，瞬时离心数秒。。。
3. 加样（样本制备区）
向上述对应的反映管中划分加入提取的待测样本RNA、阴性比照和阳性比照各5μl，，，盖紧管盖，，，瞬时离心后转移至扩增检测区。。。
4. PCR扩增检测（扩增检测区）
4.1  将反映管放入荧光PCR仪举行扩增检测。。。
4.2  循环参数设定（请参照种种仪器的操作说明举行设置）
方法 温度 时间 循环数（次）
1 逆转录反映 47℃ 30min 1
2 预变性 95℃ 10min 1
3 变性 95℃ 10s 45
4 退火、延伸及网络荧光 56℃ 45s 
方法4中56℃时荧光检测，，，检测通道：ROX / Texas Red通道为内标，，，FAM通道为麻疹病毒，，， HEX/ VIC通道为风疹病毒。。。
在ABI7500荧光PCR仪中不选ROX校正，，，淬灭基团选None。。。
4.3  效果剖析
反映竣事后需要通过调理Baseline的Start值、End值以及Threshold值，，，点击Analysis自动获得剖析效果。。。
【阳性判断值或者参考区间】
接纳受试者事情曲线（ROC）确定本试剂盒的麻疹病毒的阳性判断值为Ct＜38；；风疹病毒的阳性判断值为Ct＜38。。。
【磨练效果的诠释】
质量控制
1. 阴性比照：无典范S型扩增曲线显示；；
2. 阳性比照：FAM和HEX检测通道均呈典范S型曲线且Ct值≤30，，，同时ROX检测通道有
或无扩增曲线；；
3. 以上要求需要在统一个实验中同时知足，，，否则本次实验无效，，，需重新举行。。。
效果判读
1. 阴性效果的判读：
若是FAM、HEX检测通道无扩增曲线或Ct≥40，，，ROX检测通道有扩增曲线，，，可判样品为麻疹病毒、风疹病毒阴性；；
2. 阳性效果的判读：
若是FAM检测通道有扩增曲线且Ct＜38，，，ROX检测通道有或无扩增曲线，，，可判样品为麻疹病毒阳性；；
若是HEX检测通道有扩增曲线且Ct＜38，，，ROX检测通道有或无扩增曲线，，，可判样品为风疹病毒阳性；；
3. 可疑效果的判读：
若是FAM检测通道有扩增曲线且38≤Ct＜40，，，ROX检测通道有或无扩增曲线，，，则该样品需要举行复测，，，如复测效果FAM的Ct值仍然在38~40规模，，，有显着指数增恒久，，，可判样品为麻疹病毒，，，否则样品为麻疹病毒阴性。。。
若是HEX检测通道有扩增曲线且38≤Ct＜40，，，ROX检测通道有或无扩增曲线，，，则该样品需要举行复测，，，如复测效果HEX的Ct值仍然在38~40规模，，，有显着指数增恒久，，，可判样品为风疹病毒阳性，，，否则样品为风疹病毒阴性。。。
【磨练要领局限性】
1. 样本网络、处理、运输及生涯的失误都可能导致过失的效果；；
2. 样本处理时爆发交织污染，，，可能会泛起假阳性效果；；
3. 病毒的基因突变也可能导致假阴性效果；；
4. 本要领由于引物探针较多，，，可能形成引物二聚体导致假阳性效果。。。
【产品性能指标】
1. 最低检测限：麻疹病毒/风疹病毒均为5TCID50/ml。。。 
2. 细密性：批内细密度变异系数≤5%，，，批间细密度变异系数≤5%，，，。。。
3. 特异性：本品与登革病毒、乙型脑炎病毒、水痘带状疱疹病毒、腮腺炎病毒、流感病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、HIV弓形虫、巨细胞病毒、I型纯粹疱疹病毒、II型纯粹疱疹病毒、呼吸道合胞病毒未见交织反映，，，与其他病原体反映尚无实验数据。。。
4. 亚型检测能力：可检出麻疹病毒H1a、A、B3、D8、D9型，，，风疹病毒2B、1E型，，，其他型别尚无实验数据。。。
5. 滋扰性试验：常见滋扰物质如青霉素、地塞米松、维生素C、扑热息痛、血液、脓液、病毒灵在磨练样本中的浓度划分为20μg/ml、0.3μg/ml、30μg/ml、20μg/ml、25%、25%、200mg/ml时，，，不会影响到样本检测效果。。。
6. 本品在临床试验中检测596份咽拭子样本，，，与参比要领较量：
关于麻疹检测，，，迅速度为100%、特异度为95.7%、粗一致性为97.5%。。。
关于风疹检测，，，迅速度为100%，，，特异度为97.1%，，，粗一致性为97.6%。。。
【注重事项】
1. 本品为体外诊断试剂，，，操作职员应举行专业培训并具备一定的相关履历；；
2. 为包管实验效果的准确性和可靠性请使用已校准的移液器，，，实验用具（一次性PCR反映管、吸嘴、离心管等）需选用去RNA酶处理过的产品；；
3. 实验需要严酷分区举行（试剂准备区、样本制备区、扩增检测区），，，各区物品、事情服均为专用，，，不得交织使用，，，实验后要实时举行清洁；；
4. 样品处理必需在生物清静柜中举行，，，以；；げ僮髦霸鼻寰膊⒎乐骨樾挝廴；；
5. RNA样本应生涯于-70℃冰箱中，，，加样前应在室温充分融化、混匀并瞬时离心后使用；；
6. 每次实验应设置阴性比照和阳性比照。。。差别批号的试剂切勿混用，，，在有用期内使用试剂盒；；
7. MV/RV PCR反映液A与MV/RV PCR反映液B混淆后，，，应尽快完成实验，，，否则随着时间延伸而扩增效果变差；；
8. 实验历程中佩带一次性口罩和一次性头套，，，勤换一次性薄膜手套；；
9. 触摸PCR管时切忌戴乳胶手套，，，防止汗液或乳胶手套上的粉末等影响荧光值检测；；
10. 反映液加入模板后应倒置混匀，，，轻弹管壁去除气泡，，，瞬时离心；；
11. 使用过的吸嘴应打入盛有10%次氯酸钠的废液缸中，，，实验竣事后与其他废弃物一同集中处理；；
12. 扩增完毕后应小心取出PCR管放入密封袋中，，，严禁在PCR实验室开盖，，，若是开盖，，，气溶胶会对PCR室造成污染，，，实验效果会泛起假阳性；；
13. 实验竣事后应用10%次氯酸钠或75%酒精处理事情台和移液器，，，然后紫外照射30分钟；；
14. 本品涉及的待测样本应视为具熏染性物质，，，阻止直接接触身体。。。样本操作和处理均需切合卫生部《微生物生物医学实验室生物清静通用准则》和《医疗器械治理条例》相关要求；；
15. 本品的内标检测系统仅在风疹病毒、麻疹病毒检测均为阴性时作为对采样及提取效果的评价，，，当泛起风疹病毒、麻疹病毒阳性时，，，内标泛起与否不影响效果的判读。。。
【标识的诠释】
                                                
  温度限制      体外诊断医疗器械       参考使用说明       不得二次使用
【参考文献】
Mosquera Mdel M，，，de Ory F，，，Moreno M，，，Echevarria JE．Simultaneous detection of measles virus，，，rubella virus，，，and parvovirus B19 by using multiplex PCR．J Clin Microbiol，，，2002，，，40(1)：111-116．
【基本信息】
注册人/生产企业名称：珠海经济特区海泰生物制药有限公司
住所：珠海市唐家湾镇港湾大道立异四路18号         邮政编码：519085
联系方式：电话号码：0756-3890858             传真号码：0756-3890848
生产地点：珠海市唐家湾镇港湾大道立异四路18号     邮政编码：519085
生产允许证编号：粤食药监械生产许20040941号
【医疗器械注册证书编号/产品手艺要求编号】国械注准20183400480
【说明书批准日期及修他日期】2018.11.07